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检测服务

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详细介绍Detailed Introduction

双荧光素酶报告基因检测实验系统
原理简介
荧光素酶(Luciferase)是生物体内催化荧光素(Luciferin)或脂肪醛(Firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称,来自于自然界能够发光的生物。目前,以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛。
报告基因(reporter gene),是指其编码产物能够被快速地测定,常用来判断外源基因是否已经成功地导入受体细胞、组织或器官,并检测其表达活性的一类特殊用途的基因,主要用于判断目的基因是否成功导入到受体细胞,并在其中表达。
双荧光素酶报告基因检测系统:在单荧光素酶检测系统(只有萤火虫荧光素酶)的基础上引入了海肾荧光素酶基因,可以排除不同组之间细胞生长状况、细胞数目以及转染效率带来的干扰,起到校正的作用,从而使实验结果更为可靠。
 
实验流程和周期

客户在线下单——订单/实验材料确认——重组质粒制备——材料选择——转化/染——裂解细胞——荧光检测——数据分析
实验周期:2周
 
应用场景
1、验证microRNA同mRNA靶向互作:将待测mRNA的3’UTR序列插入报告基因载体,再共转入该microRNA,如果萤光素酶活性下降,则提示为其靶序列。
 

2、验证microRNA同lncRNA靶向互作:将候选的lncRNA序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域,检测萤光素活性。
3、启动子结构分析:将启动子区域序列(通常2k左右)进行分段截短,或对特
定位点进行突变,再分别构建入luciferase报告载体,检测其启动子活性。
 
4、启动子SNP分析:一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性,可运用萤光
素酶报告系统分析其相对活性。

5、验证特定转录因子同其调控序列的作用:将该序列(通常为启动子区域)插
入报告基因载体,同时在实验细胞中共转过表达该转录因子,可分析转录因子
过表达是否提高萤光素酶活性。

应用举例
 

优势
1 、优越的灵敏度,比Western bloting灵敏度高1000 倍以上;
2 、内源性低,哺乳动物无内源性表达;
3 、荧光素酶检测不受细胞内其它物质影响;
4 、发光检测,检测方便;
5 、灵敏度高,10-20摩尔荧光素酶分子;
6 、检测范围广,大于7个数量级。

客户下单
点击本网页右上角“注册/登录”或直接输入网址http://admin.biorun.cn/admin/custom_login.asp进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:(1)双荧光素酶报告基因所需的质粒与序列相关信息;(2)尽可能丰富的相关资料、文献。

实验结果
1、构建好的载体的图谱、全序列和注释信息;
2、构建部位的测序结果;
3、构建好的载体及其保存菌株通过快递直达申请人手中;
4、双荧光素酶的荧光比值。

参考文献
Ashkenazi S , Ortenberg R , Besser M , et al. SOX9 indirectly regulates CEACAM1 expression and immune resistance in melanoma cells[J]. Oncotarget, 2016, 7(21):30166-30177.
Astola A , Ortiz M , Calduch-Giner J A , et al. Isolation of Sparus auratus prolactin gene and activity of the cis-acting regulatory elements.[J]. General & Comparative Endocrinology, 2003, 134(1):57-61.
Wei, Lu, Honghe, et al. Erratum to: Long non-coding RNA linc00673 regulated non-small cell lung cancer proliferation, migration, invasion and epithelial mesenchymal transition by sponging miR-150-5p[J]. Molecular Cancer, 2017.
 


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